다중 웰 세포 배양 플레이트의 밀봉 및 오염 문제

다중 웰 세포 배양 플레이트의 로딩 및 취급 :

세포 배양 판은 또한 세포 수술을 수행 할 때 엄격한 무균증의 원리를 따릅니다. 모든 작업은 표준화되고 과학적이어야하며 세포 성장에 추가적인 영향을 미치지 않습니다. 가장 흔한 문제는 샘플을 추가 한 후 세포의 균일 성을 보장하고 세포의 성장 상태에 대한 배지를 변화시키는 영향을 최소화하는 방법입니다.

묻다:
96 웰 배양 판 또는 페트리 접시의 뚜껑은 매우 느슨하여 환기에 편리하지만 박테리아, 곰팡이 및 기타 오염 물질도 미끄러질 것인가?

답변:
뚜껑은 매우 느슨하고 반 오픈 문화에 속하며, 이것의 목적은 환기입니다 (사실, 배양 접시 외부의 CO2를 배양 접시와 완전히 교환하고 배양의 pH 가치를 유지하는 것입니다. 중간).
모든 것이 장단점이 있으며, 이는 물론 오염 가능성을 증가시킵니다. 또한, 이는 접시의 액체가 증발하게되며, 이는 약물의 정확한 투약에 유명합니다. 따라서 다음 두 가지 조치가 필요합니다. a. 인큐베이터의 공기는 깨끗해야합니다 (일반 자외선, 알코올 스크러빙, 인큐베이터는 가능한 한 적게 열리고 닫아야합니다) b. 인큐베이터의 습도는 항상 100%로 유지되어야합니다 (인큐베이터에 멸균 증류수가있는 싱크).
페트리 접시와 마찬가지로, 그것은 또한 거꾸로 된 뚜껑이있는 컨테이너이며 오염되지 않습니다. 주로 덮개의 "L"가장자리에 의해 생성 된 공기 흐름의 부압으로 인해, 먼지에 부착 된 미생물이 있으며, 공기 흐름에 의해 운반되는 먼지는 커버의 가장자리를 통과하여 음압을 생성 할 수 없습니다. 환기 효과는 공기의 확산을 통해서만 가능하며 공기 흐름은 생성되지 않으므로 박테리아에 대한 침투하지 않고 호흡이 필요하지 않습니다.

묻다:
24- 웰 플레이트를 사용하여 일부 우물 (초고속 벤치)에는 수술이 있으며 다른 우물에서 배양 할 세포가 있습니다. 나는 이것이 오염을 일으킬 것이라고 걱정한다. 주의를 기울여야 할 일을 모르십니까?

답변:
Ultra-Clean 벤치에서 작업이 표준화되면 괜찮을 것입니다. 나는 당신이 문화 판의 덮개를 최대한 활용하고, 작동 할 구멍 만 노출시키고, 다른 구멍을 덮개로 덮을 수 있다고 생각합니다.
사용하기 전에 종합적으로 고려하고 모든 구멍을 최대한 활용하십시오. 구멍 몇 개만 사용하면 한쪽 만 사용하고 나머지는 덮개로 덮을 수 있습니다. 먼저 오른쪽 구멍을 사용하는 데 익숙합니다 (오른손에 샘플을 추가하는 것이 편리합니다).

작동 할 때는 몇 가지 유리 슬라이드를 사용하여 보드의 한쪽면을 올리십시오. 커버를 완전히 열지 말고 일반적으로 문제가 없습니다.
고르지 않은 세포 분포 및 용액

묻다:
세포는 배양 판에 접종되며, 세포는 항상 주변 부분에 모여서 그것을 다루는 방법?

답변:
세포가 어떻게 혼합되어 있는지 물어봐도 될까요? 배양 판을 피펫 팅하거나 흔들고 있습니까? 그것이 후자이고, 원으로 흔들리는 경우, 원심력으로 인해 세포가 말초 부분에 던져 질 가능성이 큽니다. 4 주 이상!
좋은 방법은 다음과 같습니다. 종자 판을 재배하기 전에 배양 판을 인큐베이터에 몇 시간 동안 포화 상태로두고 꺼냅니다. 세포를 심을 때 힘이 가볍습니다. 천천히 추가하면 세포 서스펜션이 플레이트의 웰로 흐르도록하고 배양 된 세포는 기본적으로 고르게 자랍니다. 셰이커로 흔들리지 않으면 절대 흔들리지 않으면 세포가 당신이 말한 것처럼 서로 뭉쳐 질 것입니다.
배양 판의 구멍 직경이 작을수록이 현상은 더 명백하다. 이 현상은 24- 웰 플레이트에서 피할 수 없다. 왜냐하면 액체는 벽에 부착되어 우물의 배양 용액이 액체 수준을 형성하지 않지만 주변은 오목한 거울처럼 높기 때문이다. 그러나,이 두 종류의 오리피스 플레이트를 사용할 때, 추가 개입의 필요성으로 인해 충분한 양의 배양 솔루션을 추가 할 수 없으므로 세포가 배양 솔루션과 함께 "에지 수집"이 나타날 수 있습니다. 관찰 해야하는 지표에 따라 다릅니다. MTT 인 경우 면역 조직 화학은 세포 층으로 인한 결과에 영향을 미칩니다.
세포를 소화 할 때 세포 덩어리를 피하기 위해 균일하게 피펫 팅에주의를 기울이면 우물의 배양 용액의 양이 충분해야합니다. 일반적으로 접종 할 때 충분한 배양 솔루션을 추가하고 중재를 추가 할 때 한 번 솔루션을 변경하십시오. 중재 솔루션에 첨가 된 배양 솔루션의 양은 접종 당시 배양 솔루션의 양과 같습니다.이 경우 "에지 세트"현상이 개선 될 것이므로 시도해 볼 수 있습니다.

묻다:
내가 한 일은 플라크 형성 실험이었습니다. 세포를 균일 한 층으로 퍼뜨리는 것이 가장 좋습니다. 바이러스가 접종 될 때 대부분의 구멍은 괜찮으며 일부 구멍은 균일하지 않습니다. 세포 그룹에는 큰 차이가 있습니다. 셀을 추가 할 때 어떤 방법을 사용하는지 묻고 싶습니다.

답변:
소화 후 세포를 단일 세포 현탁액으로 피펫 팅하는 것이 중요합니다! 플레이트를 분할 할 때 각 웰의 세포 수가 일관되어 있는지 확인하십시오!
물론 처리 요소도 있습니다. 우물 사이의 평행도도 매우 중요합니다. 예를 들어, 약을 첨가 할 때는 희석 후 약을 혼합하여 각 우물의 농도가 일관되도록하십시오!
또한, 세포 및 약물을 첨가 할 때, 시험 그룹과 대조군은 샘플을 첨가하는 서열에 의해 야기 된 세포 밀도 및 약물 농도의 차이를 피하기 위해 차례로 첨가되어야한다!

묻다:
부는 것은 이미 균일하지만 판자, 6 개의 구멍 및 24 개의 구멍은 항상 다소 고르지 않으며 중간에 약간 집중되어 있습니다. 더욱이, 계수가 수행되는 것이 명백하고, 하루나 이틀 후에, 각 구멍의 밀도가 다르므로 감지에 영향을 미칩니다. 좋은 방법이 있습니까?

답변:
파스켓 피펫을 사용하는 경우 피펫의 세포가 자동으로 가라 앉기 때문에 매번 너무 많이 빨지 마십시오. 처음 몇 개의 구멍의 셀 수는 종종 크고 셀 서스펜션은 종종 균일하며 액체의 의지는 종종 균일합니다. S-Shape 경로를 따르십시오.
피펫을 사용하는 경우 셀이 손상되지 않도록 팁을 처리하고 제거해야하므로 액체를 섭취 할 때마다 우물에 해당합니다. 팁으로 일대일 구멍을 추가하는 것이 더 정확합니다. 서스펜션을 혼합하는데도주의를 기울이십시오.

병렬 그룹을 설정하려면 N이 충분히 커야합니다 (계산할 수 있음).

진탕하면 세포가 중심을 향해 집계되기 때문에 도금 후 흔들리지 마십시오. 한 번 판자하는 것이 가장 좋습니다.

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