세포 배양 플레이트의 선택 및 사용

세포 배양 플레이트 의 선택 및 사용

세포 작동을 수행 할 때 엄격한 무균의 원리는 또한 세포 배양 플레이트에도 적용됩니다. 모든 작업은 세포 성장에 대한 추가적인 영향을 미치지 않고 표준화되고 과학적이어야합니다. 가장 흔한 문제 중 하나는 샘플을 첨가 한 후 세포의 균일 성을 보장하고 세포의 성장 상태에 대한 중간 변화의 영향을 최소화하는 것입니다.

묻다:

대답:

뚜껑은 매우 느슨하고 반 오픈 문화의 일부입니다. 이것은 폭기를위한 것입니다 (실제로 페트리 접시 외부의 CO2가 페트리 접시와 완전히 교환하여 배지의 pH를 유지할 수 있습니다).

모든 것이 장단점이 있으며, 이는 물론 오염 가능성을 증가시킵니다. 또한, 이것은 페트리 접시의 액체가 증발하게되며, 이는 약물의 정확한 투약에 주목할 만하다. 따라서 다음 두 가지 조치가 필요합니다. 인큐베이터의 공기는 깨끗해야합니다 (일반적인 자외선, 알코올 스크러빙 및 가능한 한 적게 인큐베이터를 켜고 끄는) b. 인큐베이터의 습도는 항상 100%로 유지해야합니다 (멸균 증류수가있는 물 탱크는 인큐베이터에 배치됩니다).
페트리 접시와 마찬가지로, 그것은 또한 거꾸로 된 뚜껑이있는 용기이며 오염되지 않습니다. 주된 이유는 덮개의 "L"형태의 가장자리가 음성 공기 압력을 생성하여 미생물이 먼지에 부착되도록하고 공기 흐름에 의해 운반되는 먼지가 음표의 가장자리를 통과하여 음압을 생성 할 수 없기 때문입니다. 환기 효과는 공기의 확산을 통해서만 가능하며 공기 흐름은 생성되지 않으므로 박테리아에 대한 침투하지 않고 호흡이되지 않습니다.

묻다:
24- 웰 플레이트를 사용하여 일부 우물에는 조작 (벤치 내부)이 있지만 다른 우물에는 여전히 성장할 수있는 세포가 있습니다. 이런 식으로 오염이 걱정됩니다. 무엇을 조심 해야할지 모르겠습니다.

대답:
초소형 벤치에서는 작업이 표준화되면 가능해야합니다. 나는 당신이 문화 판의 덮개를 최대한 활용하고, 작동 할 구멍 만 노출시키고, 덮개로 다른 구멍을 덮을 수 있다고 생각합니다.
사용하기 전에 포괄적으로 고려하고 모든 구멍을 최대한 활용하십시오. 구멍을 몇 개만 사용하면 한쪽 면만 사용하고 나머지를 뚜껑으로 덮을 수 있습니다. 오른쪽 구멍을 먼저 사용하는 데 익숙합니다 (오른손은 샘플을 추가하기에 편리합니다).
작동 할 때는 몇 가지 유리 슬라이드를 사용하여 보드의 한쪽을 올리십시오. 뚜껑을 완전히 열지 말고 일반적으로 문제가 없습니다.

세포 및 용액의 고르지 않은 분포.

묻다:
세포가 배양 판에 시드되면 세포는 항상 말초 부분에 모이 든다. 어떻게해야합니까?

대답:
세포는 어떻게 혼합됩니까? 판을 피펫 팅하거나 흔들고 있습니까? 그것이 후자이고 원으로 흔들린 경우 원심력으로 인해 세포가 주변 부분에 던져져 중간에 세포가 줄어들 가능성이 큽니다!

다음은 좋은 방법입니다. 종자 판을 배양하기 전에 배양 판을 인큐베이터에 몇 시간 동안 포화 상태로두고 꺼냅니다. 세포를 시드 할 때는 힘이 가벼워 야합니다. 세포 현탁액이 플레이트의 웰로 흐르도록 천천히 첨가하면 배양 된 세포는 실질적으로 균일하게 자랍니다. 발진기를 흔들지 않으면 셀이 말한 것처럼 셀이 서로 뭉쳐지는 것을 잊지 마십시오.

배양 판의 구멍 직경이 작을수록이 현상은 더 명백하다. 액체의 벽이 구멍의 배양 배지를 액체 수준이 아닌 배양 배지를 만들기 때문에 24- 웰 플레이트의 현상은 피할 수 없지만 개입의 필요성으로 인해 오목한 거울처럼 주변이 높습니다. 다른 이유,이 두 종류의 우물 판을 사용하면 충분한 배양 배지를 첨가 할 수 없어 세포가 배양 배지와 함께 "가장자리 응집"이 나타납니다. 어떤 종류의 지표에 따라, MTT 인 경우 면역 조직 화학은 세포 층으로 인한 결과에 영향을 미칩니다.

세포를 소화 할 때 세포 덩어리를 피하기 위해 균일하게 피펫 팅에주의를 기울이면 웰의 배양 배지의 양이 충분해야합니다. 일반적으로, 접종 중에 충분한 양의 배양 배지가 추가되어야하며, 중재가 추가 될 때 매체를 한 번 변경해야합니다. 이 경우 "에지 세트"현상이 개선되므로 시도해보십시오.

묻다:
내가하고있는 일은 플라크 형성 실험입니다. 세포를 균일 한 층으로 퍼뜨리는 것이 가장 좋지만, 바이러스를 접종 할 때 대부분의 구멍이 양호하고 일부는 균일하지 않습니다. 세포 그룹에는 큰 차이가 있습니다. 셀을 추가 할 때 어떤 방법이 있는지 물어보고 싶습니다.

대답:
세포 소화 후, 단일 세포 현탁액으로의 피펫 팅이 중요합니다! 분할 때 각 우물의 세포 수가 동일해야합니다!
물론, 처리 계수의 우물 사이의 평행도도 매우 중요합니다. 예를 들어, 약을 첨가 할 때 약을 희석하고 혼합하여 각 우물의 농도가 일관되도록해야합니다!
또한, 세포 및 약물을 첨가 할 때, 샘플 첨가 서열에 의해 야기 된 세포 밀도 및 약물 농도의 차이를 피하기 위해 시험 그룹과 대조군을 첨가해야한다!

묻다:
부는 것은 이미 균일하지만 판자, 6 개의 구멍 및 24 개의 구멍은 항상 약간 고르지 않으며 중간에 약간 집중되어 있습니다. 그리고 계산이 완료되고, 각 구멍의 밀도는 하루나 이틀 후에 다르므로 검출에 영향을 미칩니다. 좋은 전략이 있습니까?
대답:
전달 피펫을 사용하는 경우 피펫의 셀이 자동으로 가라 앉고 처음 몇 개의 웰에 많은 셀이 있고 셀 서스펜션이 종종 균일하고 액체가 첨가되기 때문에 매번 너무 많이 빨지 마십시오. S 자형으로 가십시오. 노선.

피펫을 사용하는 경우 팁을 처리해야하며 각 피펫이 하나에 해당하도록 셀을 손상시키지 않도록 팁을 제거해야합니다. 팁이있는 일대일 구멍을 추가하는 것이 더 정확합니다. 또한 서스펜션을 혼합하는 데주의를 기울입니다. 병렬 그룹을 설정하려면 N이 충분히 커야합니다 (계산할 수 있음). 흔들리는 후에 도금 한 후에는 세포가 중간을 향해 집계 될 수 있으므로. 한 번에 모든 것을하는 것이 가장 좋습니다.